Proton Pump Inhibitors HPLC Guide
Comprehensive analytical procedure for qualitative identification of adulterant proton pump inhibitors (Omeprazole and Lansoprazole) in traditional medicines, health supplements, and botanical preparations.
1.0 Objektif & Skop Pengujian
1.0 Tujuan: Untuk menyediakan tatacara pengujian bagi pengesanan bahan campur palsu Proton Pump Inhibitor (Omeprazole dan Lansoprazole) dalam produk tradisional dan suplemen kesihatan secara kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC-PDA).
2.0 Skop: Digunapakai untuk sampel pengawasan pasaran (surveillance), aduan, pendaftaran produk, dan sampel penguatkuasaan farmasi yang diterima di Unit Penyaringan.
2.0 Radas, Reagen & Penyediaan Larutan Piawai
• Penyediaan Fasa Bergerak (Mobile Phase):
Timbang 3.55 g Anhydrous di-Sodium Hydrogen Phosphate (Na₂HPO₄) dan larutkan dalam 1000 mL Ultrapure Water (18.2 MΩ). Laraskan nilai pH kepada pH 7.6 ± 0.05 menggunakan asid ortofosforik (H₃PO₄) cair. Turas menggunakan membran nilon 0.45 µm dan degas selama sekurang-kurangnya 20 minit.
Campurkan 65% Buffer pH 7.6 dan 35% Acetonitrile (HPLC Grade) secara isokratik.
• Larutan Stok Piawai Tunggal (1.0 mg/mL):
Timbang tepat 10.0 mg Omeprazole RS dan 10.0 mg Lansoprazole RS ke dalam kelalang volumetrik 10 mL berasingan. Larutkan dan genapkan dengan Methanol.
• Larutan Piawai Campuran Bekerja (0.05 mg/mL):
Pipet 0.5 mL daripada setiap larutan stok ke dalam kelalang volumetrik 10 mL yang sama dan genapkan dengan Methanol.
• Larutan Had Pengesanan (LOD Solution, 0.003 mg/mL):
Pipet 0.6 mL larutan piawai campuran bekerja ke dalam kelalang volumetrik 10 mL dan genapkan dengan Methanol.
3.0 Tatacara Pengekstrakan Sampel Matriks
- Bentuk Tablet / Kapsul / Serbuk: Hancurkan tablet atau kosongkan cangkang kapsul sehingga menjadi serbuk halus homogen. Timbang tepat 1.0 g sampel ke dalam tiub emparan (centrifuge tube) 50 mL.
- Penambahan Pelarut: Pipet 20.0 mL Methanol ke dalam tiub emparan.
*PERHATIAN: Bagi sediaan kapsul lembut (softgel), gunakan 20.0 mL Chloroform kerana matriks minyak/gelatin tidak larut sempurna dalam Methanol. - Sonikasi: Letakkan tiub di dalam kukus ultrasonik dan sonikasi selama 15 minit.
- Pengemparan (Centrifuge): Empar larutan pada kelajuan 3000 rpm selama 10 minit bagi memisahkan enapan pepejal.
- Penurasan: Ambil cecair atas (supernatant) dan turas menggunakan penuras picagari 0.45 µm (Nylon/PTFE) terus ke dalam vial autosampler HPLC.
4.0 Parameter Instrumen & Turutan Suntikan (Sequence)
| No. Turutan | Identiti Suntikan | Bil. Suntikan | Tujuan / Kriteria |
|---|---|---|---|
| 1 | Blank (Methanol) | 1 | Penstabilan garisan dasar (baseline) |
| 2–7 | Larutan Piawai Bekerja (0.05 mg/mL) | 6 | Ujian Kesesuaian Sistem (SST) |
| 8 | Larutan LOD (0.003 mg/mL) | 1 | Verifikasi sensitiviti had pengesanan |
| 9 | Blank (Methanol) | 1 | Elak carryover |
| 10–11 | Sampel 1 (Suntikan A & B) | 2 | Ujian identifikasi duplikasi |
| 12 | Blank (Methanol) | 1 | Pencucian turus antara sampel |
| 13–18 | Sampel 2 hingga 5 (Duplikasi) | 8 | Pengujian kelompok |
| 19 | Larutan LOD | 1 | Kawalan Kualiti Dalaman (IQC Bracket) |
| 20 | Blank (Methanol) | 1 | Pembersihan |
| 21–22 | Sampel 6 (Suntikan A & B) | 2 | Sampel berikutnya |
| Akhir | Larutan LOD | 1 | Semakan Akhir Analisis |
5.0 Kriteria Kesesuaian Sistem & Interpretasi Keputusan
- %RSD Waktu Penahanan (RT): Tidak melebihi (NMT) 2.0% bagi 6 suntikan piawai.
- Faktor Pengekoran (Tailing Factor): T ≤ 2.0.
- Plat Teori (Theoretical Plates, N): N ≥ 2000.
- IQC Drift: Perbezaan peratusan waktu penahanan larutan LOD tidak melebihi 3.0% sepanjang analisis.
- Waktu Penahanan: Puncak kromatogram sampel bersamaan dengan waktu penahanan piawai rujukan dalam julat ± 2%.
- Spektrum UV: Spektrum UV PDA (190–400 nm) sepadan dengan spektrum piawai dengan indeks persamaan > 0.999.
- Keluasan Puncak: Puncak sampel melebihi keluasan puncak larutan LOD (0.003mg/mL).
Sekiranya sampel disyaki POSITIF mengandungi Omeprazole atau Lansoprazole, penyediaan sampel baharu hendaklah dijalankan oleh Penganalisis Kedua (Second Analyst) pada tarikh berbeza dan disahkan melalui analisis GCMS (`PKKK/300/UP/004` / `PKKK/300/UP/017`).