RRLC Agilent 1200 Series Guide
Panduan standard operasi bagi pengendalian instrumen Rapid Resolution Liquid Chromatography (RRLC) Agilent 1200 Series. Merangkumi kawalan injap purge manual, persediaan kaedah ChemStation, penentukuran DAD 190–400 nm, susunan urutan batch (Sequence), dan tatacara pencucian kolum.
|
NPRA PUSAT KAWALAN KUALITI |
ARAHAN KERJA: PENGENDALIAN ALAT RAPID RESOLUTION LIQUID CHROMATOGRAPHY HP1200 | |
| No. Dokumen: PKKK/300/UP/003 (dan HPLC Agilent 1: UP/044) | Terbitan / Semakan: 3 / 0 | |
| Tarikh Kuatkuasa: 10 April 2026 | Bahagian / Seksyen: SPPK · Unit Penyaringan | |
Untuk memastikan langkah-langkah yang terlibat dalam proses pengendalian alat Rapid Resolution Liquid Chromatography (RRLC) HP1200 semasa pengujian sampel dijalankan dengan cekap, tepat dan selamat mengikut standard akreditasi ISO/IEC 17025.
Digunapakai semasa mengendalikan alat RRLC HP1200 bagi pengujian produk tradisional, suplemen kesihatan dan kosmetik di Unit Penyaringan.
RRLC: Rapid Resolution Liquid Chromatography (Kromatografi Cecair Resolusi Pantas).
DAD: Diode Array Detector (Pengesan Diod Array Agilent G1315C).
3.1 Pegawai Farmasi:
a) Memastikan instrumen RRLC dikendalikan dan diselenggara mengikut spesifikasi.
b) Menyelia pelaksanaan analisis dan mengesahkan data SST serta laporan ujian.
3.2 Penolong Pegawai Farmasi (PPF):
Mengendalikan instrumen mengikut arahan kerja, menjalankan purging, pemantauan tekanan, dan mengisi buku log instrumen.
- Buka suis bekalan kuasa utama di dinding dan unit UPS.
- Buka suis kuasa pada setiap modul Agilent 1200 (Degasser G1379B, Binary Pump G1312B, Autosampler G1329B, Column Oven G1316B, DAD G1315C).
- Buka komputer dan klik ikon “Instrument 1 (online)” ChemStation pada desktop.
- Operasi Injap Purge Manual:
Putar injap purge pada pam Binary (injap hitam hadapan pam) lawan arah jam sebanyak 1.5–2 pusingan untuk membuka saluran buangan (waste). - Pada perisian ChemStation: Klik ikon Pam ➔ Pilih Purge ➔ Setkan kadar alir 5.0 mL/min selama 3–5 minit bagi setiap saluran pelarut (Line A & Line B).
- Setelah gelembung udara keluar sepenuhnya: Turunkan kadar alir kepada 0.1 mL/min ➔ Putar injap purge ikut arah jam untuk menutup injap dengan kemas ➔ Naikkan kadar alir perlahan-lahan ke kadar alir kaedah analisis.
Buka kaedah sedia ada: Method > Load Method. Atau buat kaedah baharu: Method > Edit Entire Method.
4.2.1 Binary Pump Settings:
- Setkan Flow Rate mengikut SOP ujian (Contoh: 0.7 – 1.8 mL/min).
- Tetapkan perkadaran pelarut Solvent A (Akueus / Buffer) dan Solvent B (Organik / ACN / MeOH).
- Tetapkan Stop Time analisis (cth: 20.0 minit, 35.0 minit).
- Tetapkan Pressure Limits: Minimum: 10 bar, Maksimum: 400 bar (atau 600 bar untuk kolum RRHT sub-2µm).
4.2.2 Autosampler (ALS) Settings: Isikan Injection Volume (cth: 10 µL atau 15 µL) dan tetapkan Draw Speed serta Needle Wash.
4.2.3 Column Compartment (TCC): Tetapkan suhu ketuhar (cth: 30 °C, 40 °C, 45 °C) dan pastikan kedua-dua pemanas kiri/kanan diaktifkan.
4.2.4 Diode Array Detector (DAD) Settings:
- Signals: Pilih Signal A (Panjang gelombang sasaran analit, cth: 240 nm, 280 nm, 284 nm) dengan Bandwidth 4 nm.
- Spectrum Store: Pilih “All” (190 nm hingga 400 nm, Step: 2 nm) bagi membolehkan perbandingan spektrum UV penuh dengan Standard Reference.
- Klik kanan pada tetingkap kromatogram online ➔ Pilih “Change” ➔ Pantau garisan dasar (baseline drift < 0.5 mAU/hr).
- Pastikan bacaan tekanan stabil (tekanan berfluktuasi < 1 bar).
- Fungsi Overlay Signal Agilent:
Bagi menindih (overlay) UV spektrum puncak sampel dengan standard rujukan: Tekan serentak kekunci Ctrl + Alt dan klik pada puncak kromatogram untuk memaparkan spektrum UV bertindih secara langsung.
Klik menu Sequence > Sequence Parameters ➔ Masukkan laluan fail data (Data Path) dan Subdirectory.
Klik Sequence > Sequence Table ➔ Masukkan susunan suntikan:
| Line | Vial | Sample Name | Method Name | Inj/Vial | Sample Type |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | Blank (Methanol / Diluent) | METHOD.M | 1 | Blank |
| 2 | 2 | Working Standard (SST) | METHOD.M | 6 | Calibration / SST |
| 3 | 3 | LOD Sensitivity Check | METHOD.M | 1 | Control |
| 4 | 1 | Blank Carry-over | METHOD.M | 1 | Blank |
| 5..n | 10.. | Sampel Pengawasan SPPK | METHOD.M | 2 | Sample |
| End | 2 | IQC Bracketing Standard | METHOD.M | 1 | Control |
Simpan Sequence (Sequence > Save Sequence) dan klik butang “Run Sequence”.
- Cuci sistem dan kolum dengan fasa gerak 5% Methanol dalam Air Suling selama 1 jam pada kadar alir 1.0 mL/min untuk mengeluarkan sisa garam/buffer.
- Tukar kepada 100% Acetonitrile / Methanol dan pam selama 30 minit pada kadar alir 1.0 mL/min untuk mencuci analit hidrofobik.
- Sekiranya kolum ingin disimpan: Pam larutan simpanan 70% ACN : 30% Air selama 15 minit.
- Tutup aliran pam (Turn off Flow) dan matikan lampu DAD (Turn off Lamp).
- Tutup perisian ChemStation, matikan suis modul instrumen, dan catatkan penggunaan ke dalam logbook.
| No. Borang / Dokumen | Tajuk Rekod Kualiti | Lokasi Simpanan | Tempoh Simpanan |
|---|---|---|---|
| Borang UP/003 | Buku Log Pengendalian & Penyelenggaraan RRLC HP1200 Agilent | Bilik Instrumen HPLC (B2-01) | 6 Tahun |
| Borang UP/044 | Buku Log Pengendalian HPLC Agilent 1 | Bilik Instrumen HPLC (B2-01) | 6 Tahun |
| Borang UP/005 | Borang Keputusan Ujian Penyaringan Kromatografi (HPLC/RRLC) | Fail Sampel Seksyen SPPK | 6 Tahun |