HPLC Shimadzu Prominence-i Guide
Panduan komprehensif bagi prosedur penghidupan sistem, penyediaan kaedah (method setting), auto-purge saluran pelarut, penstabilan garis dasar PDA, konfigurasi suntikan batch, dan tatacara pencucian kolum untuk pengujian penyaringan campurpalsu.
|
NPRA PUSAT KAWALAN KUALITI |
ARAHAN KERJA: PENGENDALIAN ALAT SHIMADZU HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (PROMINENCE-I) | |
| No. Dokumen: PKKK/300/UP/011 (dan HPLC 3 & 4: UP/041, UP/042) | Terbitan / Semakan: 3 / 0 | |
| Tarikh Kuatkuasa: 10 April 2026 | Bahagian / Seksyen: SPPK · Unit Penyaringan | |
Prosedur ini hendaklah digunapakai untuk mengendalikan alat Shimadzu HPLC (Prominence-i LC-2030C 3D) bagi ujian penyaringan dan kuantitasi campurpalsu dalam produk tradisional, suplemen kesihatan dan produk kosmetik di Unit Penyaringan.
• HPLC: High Performance Liquid Chromatography (Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi).
• PDA / DAD: Photo Diode Array Detector (Pengesan Diod Array bagi imbasan UV 190–800 nm).
• SST: System Suitability Test (Ujian Kesesuaian Sistem bagi kebolehulangan suntikan %RSD ≤ 2.0%).
• IQC: Internal Quality Control (Kawalan Kualiti Dalaman).
• Auto Purge: Proses pembuangan gelembung udara dan penggantian pelarut pada kadar alir tinggi 5.0 mL/min.
3.1 Ketua Unit / Pegawai Farmasi Bertanggungjawab:
Memastikan prosedur ini dipatuhi sepenuhnya dan menyelia integriti data kromatografi.
3.2 Pegawai Farmasi:
a) Menyelia proses pengendalian alat oleh Penolong Pegawai Farmasi.
b) Mengesahkan keputusan integrasi puncak kromatogram dan kesesuaian sistem (SST).
3.3 Penolong Pegawai Farmasi (PPF):
Mengendalikan alat mengikut SOP, menjalankan semakan harian, auto-purge, flushing kolum, dan merekod logbook penyelenggaraan alat.
- Buka semua suis utama bekalan kuasa di dinding dan suis Unit Bekalan Kuasa Tanpa Gangguan (UPS).
- Buka suis kuasa pada unit utama mesin HPLC Shimadzu (LC-2030C 3D).
- Pada panel LCD instrumen, masukkan Passcode:
00000dan tekan OK. - Buka komputer dan klik dua kali pada ikon “LabSolutions” di desktop.
- Pada paparan log masuk, masukkan User ID:
Admindan biarkan ruangan Password kosong. Klik “OK”. - Dalam menu utama, klik “Instrument” dan seterusnya pilih “LC-2030C 3D” (atau HPLC 3 / HPLC 4).
Buka fail method yang dikehendaki: File > Open Method File.
Jika ingin membuat kaedah baharu: File > New Method > Method Settings.
4.2.1 Pump Settings (Tetapan Pam):
- Mode: Low Pressure Gradient (Untuk 4 Saluran A, B, C, D).
- Isikan Total Pump Flow mengikut SOP kaedah spesifik (Contoh: Steroid = 0.7 mL/min, PPI = 1.0 mL/min, Lovastatin = 1.8 mL/min).
- Tetapkan perkadaran pelarut Solvent B Conc, Solvent C Conc, Solvent D Conc (Contoh: Isokratik 65% Buffer : 35% ACN).
- Isikan had tekanan Pressure Limit (Pump A): Pmax = 400 bar (Had keselamatan kolum).
4.2.2 Autosampler Setting: Tetapkan suhu dulang sampel (Sampler Temperature: 4 °C bagi analit sensitif suhu seperti PPI/Omeprazole, atau Room Temp).
4.2.3 Column Setting: Tetapkan suhu Oven berdasarkan SOP kaedah (Contoh: 30 °C, 40 °C, 45 °C). *Perhatian: Jangan tetapkan melebihi 80 °C. Tandakan (✓) pada Heater On.
4.2.4 Detector Setting (PDA): Setkan Start Wavelength 190 nm dan End Wavelength 400 nm (atau 800 nm). Setkan Cell Temperature mengikuti suhu oven kolum (sekiranya suhu oven > 60 °C, tetapkan Cell Temp sebagai 60 °C).
4.2.5 LC Time Program (Changeable Gradient):
Bagi analisis gradien, setiap baris mewakili perubahan komposisi fasa bergerak. Klik “Draw Curve” untuk mengesahkan profil elusi.
Wajib: Di akhir analisis gradien, pastikan komposisi fasa bergerak dikembalikan kepada komposisi permulaan (Re-equilibration) sekurang-kurangnya 5–10 minit sebelum suntikan seterusnya.
Amaran Intermediate: Jika menukar daripada larutan Buffer Bergaram kepada 100% Organik (Methanol/ACN), saluran wajib dibilas dahulu dengan larutan perantara (Intermediate: 90% Air Suling : 10% Methanol) selama 30 minit bagi mengelakkan garam buffer termendap dan menyumbat injap pam.
- Muat turun fail kaedah dengan klik butang “Download” pada tetingkap RealTime.
- Klik butang “Instrument On/Off” untuk memulakan aliran pam dan pemanas ketuhar.
- Pantau bacaan tekanan (Pressure). Pastikan tiada turun naik tekanan yang mendadak (Rippling < 2%).
- Klik ikon “Plot” pada tetingkap Real Time untuk memantau garis dasar (baseline) PDA sekurang-kurangnya 15–30 minit sehingga stabil sepenuhnya (Drift < 1.0 mAU/hr).
- Sebelum memulakan suntikan sampel, klik “Stop” pada paparan Plot.
Klik “Real Time Batch” pada panel Assistant Bar sebelah kiri > Klik kanan pada jadual batch > Pilih “Add Row”. Susun mengikut urutan ISO 17025 berikut:
| Vial No. | Sample Name | Sample Type | Inj Volume | Tujuan / Kriteria |
|---|---|---|---|---|
| Vial 1 | Blank (Pelarut / Diluent) | Blank | 10 – 20 µL | Tiada puncak gangguan pada RT analit sasaran |
| Vials 2–7 | Working Standard Solution (SST) | Standard | 10 – 20 µL | 6× suntikan ulangan: Peak Area %RSD ≤ 2.0%, Tailing T ≤ 2.0 |
| Vial 8 | LOD / Sensitivity Check | Control | 10 – 20 µL | Nisbah Signal-to-Noise S/N ≥ 3 |
| Vial 9 | Blank Re-injection | Blank | 10 – 20 µL | Semakan carry-over sistem |
| Vials 10–19 | Sampel Ujian (Inj A & B) | Unknown | 10 – 20 µL | 2× suntikan bagi setiap sampel pengawasan/aduan |
| Vial 20 | IQC Bracketing Standard | Control | 10 – 20 µL | Drift kawasan puncak ≤ 5.0% sepanjang batch |
Simpan fail batch (Save Batch File) dan klik butang hijau “Start Real Time Batch”.
- Jika fasa bergerak mengandungi Buffer / Garam / Asid:
Flush pam dan kolum dengan 90% Air Suling : 10% Methanol selama 30 minit (@ 1.0 mL/min) ➔ kemudian flush dengan 100% Organik (Methanol/ACN) selama 30 minit ➔ akhir sekali flush dengan 70% Pelarut Organik : 30% Air selama 15 minit bagi penyimpanan kolum. - Jika fasa bergerak hanya pelarut organik tulen (MeOH/ACN/Water):
Flush dengan 100% Pelarut Organik selama 30 minit ➔ diikuti 70% Organik : 30% Air selama 15 minit. - Setelah proses flushing selesai, klik ikon “Instrument ON/OFF” untuk mematikan pam dan pemanas kolum.
- Tutup perisian Real Time dan LabSolutions. Matikan suis kuasa utama instrumen dan catatkan penggunaan ke dalam logbook.
| No. Borang / Dokumen | Tajuk Rekod Kualiti | Lokasi Simpanan | Tempoh Simpanan |
|---|---|---|---|
| Borang UP/011 | Buku Log Pengendalian & Penyelenggaraan HPLC Shimadzu (LC-2030C) | Bilik Instrumen HPLC (B2-01) | 6 Tahun |
| Borang UP/041 | Buku Log Pengendalian HPLC 3 Shimadzu Prominence-i | Bilik Instrumen HPLC (B2-01) | 6 Tahun |
| Borang UP/042 | Buku Log Pengendalian HPLC 4 Shimadzu Prominence-i | Bilik Instrumen HPLC (B2-01) | 6 Tahun |
| Borang UP/005 | Borang Keputusan Ujian Penyaringan Kromatografi (HPLC-PDA) | Fail Sampel Seksyen SPPK | 6 Tahun |