PKKK/300/UP/011 Pengendalian Alat Shimadzu HPLC (Prominence-i LC-2030C 3D)

Pastikan bekalan kuasa utama, UPS, dan komputer pengawal disambungkan dengan baik, kemudian hidupkan suis utama di dinding.

Tekan suis kuasa pada panel hadapan instrumen HPLC Shimadzu Prominence-i. Tunggu proses self-test dan inisialisasi modul selesai.

Pada panel LCD instrumen, masukkan kata laluan keselamatan: 00000, kemudian tekan OK.

1. Pada desktop komputer, klik dua kali pada ikon “LabSolutions”.

2. Pada paparan login, User ID: Admin dan ruangan Password dibiarkan kosong. Klik “OK”.

3. Dalam menu utama LabSolutions, klik “Instrument” dan seterusnya pilih “LC-2030C 3D” untuk membuka tetingkap operasi Real-Time Analysis.

▹ Membuka fail method sedia ada: Klik File > Open Method File dan pilih kaedah yang dikehendaki.

▹ Mencipta fail method baharu: Klik File > New Method > Method Settings untuk membuka tetingkap Method Editor.

1. Mode: Pilih Low Pressure Gradient (untuk sistem 4 injap/valve LPGE).

2. Total Pump Flow: Isikan kadar aliran mengikut kaedah analisis (cth: 1.0000 mL/min).

3. Solvent Concentration: Isikan peratusan pelarut mengikut kaedah (cth: Solvent B Conc: 70% MeOH ; Solvent C Conc: 30% H2O).

4. Pressure Limits: Isikan had tekanan maksimum Pump A (cth: 250 bar).

📷 Rajah 1: Tetingkap Pump Settings (Low Pressure Gradient, Flow, Solvent Conc & Pressure Limit 250 bar)

1. Tandakan Autosampler.

2. Cooler Temperature: Suhu ruang sampel boleh ditetapkan jika kaedah memerlukan kawalan suhu (cth: 15 °C atau 5 °C).

3. Rinse Settings: Setkan Rinsing Speed (35 µL/sec), Rinsing Volume (500 µL), dan Rinse Mode (Before and after aspiration).

📷 Rajah 2: Tetingkap Autosampler Setting (Cooler Temperature & Rinse Settings)

1. Tandakan Column Oven sekiranya kaedah analisis memerlukan pemanas suhu kolum (heating).

2. Oven Temperature: Tetapkan suhu oven kolum mengikut kaedah yang ditetapkan (cth: 40 °C).

3. Temperature Limit: Pastikan had suhu maksimum disetkan (cth: 90 °C). Amaran: Jangan set suhu melebihi 80–85 °C melainkan disyorkan khusus oleh pengeluar turus.

📷 Rajah 3: Tetingkap Column Oven Setting (Oven Temperature & Heating Checkbox)

1. Wavelength: Setkan Start Wavelength dan End Wavelength berdasarkan kaedah (cth: 190 nm hingga 800 nm).

2. Cell Temperature: Tandakan Cell Temperature mengikut suhu column oven (cth: 40 °C).

3. Syarat Suhu Sel: Sekiranya suhu column oven > 60 °C, setkan Cell Temperature sebagai 60 °C. Sekiranya pemanas column oven tidak digunakan, Cell Temperature tidak perlu ditandakan.

📷 Rajah 4: Tetingkap Detector Setting PDA (Wavelength Range 190–800 nm & Cell Temperature)

1. LC Stop Time: Isikan masa berhenti analisis (LC stop time) dan klik “Apply to All acquisition time”.

2. Sekiranya masa analisis akhir belum diketahui, biarkan dalam keadaan Default sehingga masa elusi puncak diperolehi.

📷 Rajah 5: Tetingkap Data Acquisition (LC Stop Time & Acquisition Time PDA)

Sekiranya kaedah adalah Isokratik (tiada perubahan kecerunan elusi / non-changeable gradient), hanya baris pertama sahaja yang diisikan dengan arahan Controller Stop pada masa (Time) yang sama dengan LC Stop Time.

📷 Rajah 6: Tetingkap LC Time Prog untuk Kaedah Isokratik (Baris Pertama Sahaja)

1. Sekiranya kaedah Gradient (Changeable Gradient) digunakan, setiap baris mewakili satu arahan langkah perubahan fasa bergerak mengikut masa (Time, Module: Pumps, Command: Solvent B Conc, Value).

2. Sahkan profil elusi dengan klik butang “Draw curve” untuk melihat graf kecerunan.

3. Prinsip Rekalibrasi: Setiap kali kaedah changeable gradient digunakan, komposisi pelarut mestilah diprogramkan kembali ke setting asal (cth: Composition B = 30% pada minit akhir sama seperti minit 0) bagi mengelakkan pergeseran masa penahanan (retention time shift) pada suntikan seterusnya.

📷 Rajah 7: Tetingkap LC Time Prog & Plot Lengkung Kecerunan (Draw Curve)

Sistem Auto Purge mengeluarkan buih udara dalam saluran pelarut bagi mengelakkan gelembung memasuki pam dan turus. Auto Purge wajib dijalankan sekiranya: (a) Pelarut ditambah ke dalam botol pelarut, atau (b) Pelarut bertukar jenis.

📷 Rajah 8: Tetingkap AutoPurge (Purge Order, Mobile Phase A/B 3 minit, Autosampler Purge 10 minit)

📷 Rajah 9: Gambar Rajah Skematik Peralihan Saluran Pelarut melalui Larutan Perantaraan (Intermediate)

1. Buka fail method yang telah disahkan.

2. Klik ikon “Download” (atau “Download and Close”) untuk memuatkan parameter kaedah ke dalam memori perkakasan HPLC.

📷 Rajah 10: Butang “Download and Close”

3. Pada bar alat atas, klik ikon Auto Purge untuk memulakan proses penyingkiran buih udara secara automatik.

📷 Rajah 11: Bar Alat Atas Menunjukkan Ikon Auto Purge

4. Tunggu sehingga proses Auto Purge selesai (status bar menunjukkan 100% dan dialog ditutup).

📷 Rajah 12: Dialog Kemajuan AutoPurge (Purging in progress. Please wait)

1. Hidupkan aliran pam fasa bergerak dengan klik pada ikon “Instrument On/Off”.

📷 Rajah 13: Bar Alat Menunjukkan Ikon Instrument On/Off

2. Semakan Aliran & Tekanan: Pada tetingkap Real Time Window di sebelah kanan, perhatikan jadual status instrumen. Apabila pam sedang beroperasi, bacaan tekanan (Pressure / Press) akan tertera (cth: 2 bar atau nilai operasi biasa turus). Sekiranya nilai tekanan ialah sifar “0”, ini menunjukkan pam tidak berjalan.

📷 Rajah 14: Jadual Status Masa Nyata Menunjukkan Bacaan Tekanan (Press), B.Conc, dan Suhu Oven

Pantau paparan status suhu oven kolum dan sel PDA sehingga kedua-dua bacaan suhu mencapai nilai sasaran yang ditetapkan dalam kaedah dan stabil sepenuhnya sebelum meneruskan ke langkah seterusnya.

1. Garis dasar (baseline) sistem hanya boleh dipantau sekiranya butang “Plot” di bahagian atas tetingkap diklik.

📷 Rajah 15: Bahagian Atas Tetingkap Real-Time Menunjukkan Butang “Plot”

2. Jalankan pemantauan Plot sekurang-kurangnya selama tempoh satu running time kaedah pengujian spesifik yang hendak dijalankan. Pastikan kadar aliran fasa bergerak menghasilkan garis dasar yang mendatar, stabil, dan tekanan pam konsisten.

3. Sebelum suntikan sampel dimulakan, klik butang “Stop” untuk menghentikan mod Plot.

📷 Rajah 16: Tetingkap Garis Dasar PDA & Lokasi Butang “Stop”

Untuk memerhati kromatogram pada panjang gelombang khusus secara RealTime:

1. Klik kanan pada kawasan PDA Chromatogram dan pilih “Display Settings...”.

📷 Rajah 17: Menu Klik Kanan Memilih “Display Settings...”

2. Pada tab PDA, tandakan saluran (Channel) dan masukkan panjang gelombang sasaran (cth: Ch1: 254 nm, Ch2: 300 nm). Klik “OK”.

📷 Rajah 18: Tetingkap Display Settings Menetapkan Gelombang Pantauan Saluran PDA

3. Kromatogram bagi gelombang yang dipilih kini akan dipaparkan secara langsung pada skrin pemantauan.

📷 Rajah 19: Paparan Kromatogram Masa Nyata pada Gelombang 254 nm & 300 nm

1. Pada bar pembantu di sebelah kiri (Assistant Bar), klik ikon “Single Run”.

📷 Rajah 20: Ikon Single Run

2. Isikan medan maklumat perolehan data dalam dialog Single Run:

3. Klik “OK” untuk memulakan suntikan tunggal secara serta-merta.

📷 Rajah 21: Tetingkap Single Run Menunjukkan Pengisian Sample Name, Data File, Tray No, Vial# & Isipadu Suntikan

1. Pada menu utama atau Assistant Bar di sebelah kiri, klik ikon “Real Time Batch”.

📷 Rajah 22: Ikon Realtime Batch

2. Untuk menambah baris suntikan dalam jadual batch: Klik kanan pada jadual batch dan pilih “Add Row...”.

📷 Rajah 23: Klik Kanan pada Jadual Batch dan Pilih “Add Row...”

3. Lengkapkan setiap baris jadual turutan suntikan batch:

4. Simpan fail jadual batch (.lcb) dan klik “Start Real Time Batch” untuk memulakan siri suntikan automatik.

📷 Rajah 24: Contoh Jadual Batch Lengkap (Vial#, Tray Name, Method File, Data File & Inj. Volume)

3. Mematikan Sistem: Setelah semua pembilasan selesai, klik ikon “Instrument ON/OFF” pada bar alat atas untuk mematikan pam dan lampu pengesan.

📷 Rajah 25: Bar Alat Menunjukkan Penutupan Sistem Melalui Ikon Instrument Off

4. Tutup perisian Real-Time Analysis LabSolutions, tutup suis utama mesin HPLC, dan catatkan penggunaan dalam log rekod makmal.

*Nota Kolum: Tatacara shutdown ini adalah khusus untuk turus fasa terbalik (reversed-phase column seperti C18). Bagi kolum jenis lain (cth: HILIC, Normal Phase, Ion-Exchange), sila semak manual pengeluar turus terlebih dahulu.